重组大肠杆菌BL21-pET28a(+)-ADH诱导表达羰基还原酶的条件优化与应用
目的:对重组大肠杆菌E.coli BL21-pET28a(+)-ADH表达羰基还原酶的条件进行优化,以增加目的蛋白的表达量,提高生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的转化率.方法:将重组质粒pET28a(+)-ADH转化E.coli BL21后,对诱导过程产生影响的4个因素,诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度及摇菌转数,利用SPSS统计学软件进行正交实验设计,并对实验结果进行直观分析及方差分析,对实验得出的最佳搭配诱导条件进行验证.结果:直观分析中诱导温度的R值最大,其次为摇菌转数和诱导剂IPTG浓度,诱导时间的R值最小;方差分析表明诱导温度的P值小于0.05,而摇菌转数、IPTG浓度及时间因素的P值均大于0.05.利用优化后的菌种生物合成(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇,转化率达到95.16%.结论:本实验的最优诱导条件为,诱导温度25℃、诱导摇菌转数200r·min-1、诱导剂IPTG浓度0.5mmol·L-1、诱导时间6h.且重组菌对于(S)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的转化率达到95.16%.
作 者： 李莉 张芳 罗晨 阚静 王旻 作者单位： 李莉,罗晨,阚静,王旻 (中国药科大学生命科学与技术学院,南京,210009)张芳(南京中医药大学药学院生物制药教研室,南京,210046)
刊 名： 药学与临床研究 ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL AND CLINICAL RESEARCH 年，卷(期)： 2010 18(2) 分类号： Q78 关键词： 羰基还原酶 条件优化 正交试验 直观分析 方差分析 生物转化