大鼠脑源性神经营养因子基因T载体的构建及鉴定
目的:探讨利用T载体完成大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)产物克隆的可行性.方法:提取大鼠脑组织总RNA,利用M-MLV逆转录酶及oligo-dT引物逆转录合成cDNA第一条链,再利用exTaq酶及BDNF上、下游引物扩增出BDNF cDNA,最后利用Buffer Ⅰ连接液将BDNF基因克隆入T载体用于测序及下一步克隆.结果:成功构建了BDNF基因T载体,经双脱氧链终止法测序证实为大鼠BDNF基因.结论:利用T载体克隆BDNF基因PCR产物简便、快捷,成功率高.
作 者： 吴燕峰 王鹏 唐勇 黄霖 杨睿 沈慧勇 作者单位： 吴燕峰(中山大学附属第二医院脐血库)王鹏,唐勇,黄霖,杨睿,沈慧勇(中山大学附属第二医院骨科,中山大学脊髓损伤研究所,510120,广州市沿江西路107号)
刊 名： 中国脊柱脊髓杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD 年，卷(期)： 2006 16(4) 分类号： Q786 关键词： 脑源性神经营养因子 T载体 基因克隆