猪γ干扰素基因的合成、表达及纯化
目的 通过人工合成猪γ干扰素(poIFN-γ)基因的编码序列,提高目的蛋白的表达.方法 根据poIFN-γ的氨基酸序列,选择大肠杆菌所偏爱的密码子,设计并合成了24个寡核苷酸片段.通过重叠区扩增法,利用PCR合成poIFN-γ的成熟蛋白编码基因,克隆人pGEM-7Zf(+)载体,转化大肠杆菌TG1.经测序证实后,构建原核表达载体pBV222/poIFN-γ,并转化大肠杆菌DH5γ,经诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及纯化.结果 酶切及测序结果表明表达载体构建成功,工程菌诱导表达后的电泳图谱在相对分子质量约16 500的位置出现明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的55%,占包涵体中总蛋白的80%,经Ni2+-NTA亲和层析纯化,纯度达90%以上.结论 已获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪γ干扰素进行复性及活性研究奠定了基础.
作 者： 王云龙 李玲玲 李晨阳 吴阳 作者单位： 王云龙,李晨阳(郑州职业技术学院,郑州,450121;河南省生物工程技术研究中心,郑州,450002)李玲玲(河南省生物工程技术研究中心,郑州,450002;河南师范大学生命科学学院,新乡,453007)
吴阳(河南省生物工程技术研究中心,郑州,450002;郑州轻工业学院食品与生物工程学院,郑州,450002)
刊 名： 中国生物制品学杂志 ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS 年，卷(期)： 2007 20(7) 分类号： Q786 S85 关键词： 猪γ干扰素 基因合成 表达 纯化