截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定
为构建HCV截短型ns5b△21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体.运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5b△21基因;克隆入原核表达载体pRSETA.将重组表达质粒pRSETA-ns5b△21转化B121大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5b△21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清.说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体.
作 者： 田江红 徐志凯 雷迎峰 尹文 陈任安 汪桦 吕欣 杨敬 孙梦宁 姚敏 作者单位： 第四军医大学基础部微生物学教研室,西安,710032 刊 名： 科学技术与工程 ISTIC 英文刊名： SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING 年，卷(期)： 2010 10(4) 分类号： Q343.17 关键词： HCV NS5B RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达