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团头鲂微卫星标记的快速制备
采用磁珠富集法与放射性杂交相结合开发团头鲂(Megalobrama amblycephala)基因组微卫星资源.以团头鲂基因组DNA为材料,经Sau 3AⅠ限制性内切酶消化后,选取400～900 bp的片段进行PCR全基因组扩增,并利用生物素标记的(CA)15探针进行微卫星片段的富集.将得到的片段与T载体连接后转入DH5a大肠杆菌中,然后利用γ-32P标记的放射性同位素探针进行第二轮杂交.结果表明,共获得微卫星基因组文库2 000个菌,杂交前菌落PCR检测阳性克隆率为50%;杂交后得到的阳性克隆为230个,占11.5%.从得到的230个阳性克隆中挑出120个进行测序,有94个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列,其中46个(48.94%)有随机侧翼区,可以设计引物;14个缺乏足够的侧翼序列.在得到的微卫星序列中,重复单元除CA/GT外,还观察到CT、AG、CG、CAA、CTCA等重复单元.在单一型标记中,完美型占53.15%,非完美型为37.84%;混合型标记占9.01%.另外,微卫星重复次数主要集中在5～30次,占75.68%.本研究旨在对团头鲂基因组资源的开发利用起到一定的促进作用,并为团头鲂养殖品系的优化、遗传多样性的检测及遗传图谱的构建等奠定基础.
作 者： 李绍戊 常玉梅 梁利群 孙效文 LI Shao-wu CHANG Yu-mei LIANG Li-qun SUN Xiao-wen 作者单位： 李绍戊,LI Shao-wu(中国水产科学研究院,黑龙江水产研究所,黑龙江,哈尔滨,150070;上海水产大学,生命科学与技术学院,上海,200090)常玉梅,梁利群,孙效文,CHANG Yu-mei,LIANG Li-qun,SUN Xiao-wen(中国水产科学研究院,黑龙江水产研究所,黑龙江,哈尔滨,150070)
刊 名： 中国水产科学 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA 年，卷(期)： 2006 13(2) 分类号： Q78 关键词： 团头鲂 微卫星 磁珠富集【团头鲂微卫星标记的快速制备】相关文章：
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