Tau融合蛋白及其缺失突变体与朊蛋白的体外作用分析
在部分朊病毒病(prion diseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prion protein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX-2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GST-tau.利用GST pull-down及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23-231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GST pull-down和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.
作 者： 王小凡 韩俊 董辰方 韩露 万言珍 李锋 安润 董小平 WANG Xiao-Fan HAN Jun DONG Chen-Fang HAN Lu WAN Yan-Zhen LI Feng AN Run DONG Xiao-Ping 作者单位： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病预防控制国家重点实验室,北京,100052 刊 名： 中国生物化学与分子生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(5) 分类号： Q5 关键词： 微管相关蛋白tau 朊蛋白 分子间相互作用