人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化
将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用Ni2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,Western-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.
作 者： 李桂英 邹德生 周立宏 曹玉华 LI Gui-ying ZOU De-sheng ZHOU Li-hong CAO Yu-hua 作者单位： 吉林大学,分子酶学工程教育部重点实验室,长春,130021 刊 名： 吉林大学学报（理学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 2006 44(5) 分类号： Q786 关键词： 人细胞周期蛋白D1 表达 包涵体 融合蛋白 蛋白质纯化 大肠杆菌