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修饰的含前S1、前S2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达
用BamHⅠ和BglⅡ双酶切合SS2嵌合基因片段的重组质粒pAO815-SS2,分离含AOX1启动子区、SS2嵌合基因和AOX1转录终止序列的表达盒.将分离的BamHⅠ-BglⅡ表达盒与经BamHⅠ线性化的pAO815-SS1质粒连接,转化大肠杆菌Top10F',提取质粒,用BamHⅠ和BglⅡ双酶切分析重组质粒并筛选正向插入SS2表达盒的重组子.将该重组质粒用电转化法导入Pichia pastoris GS115细胞,经表型筛选、小试表达和产物鉴定,构建了重组表达菌株GS115-SS1S2.重组菌株经甲醇诱导后制备抗原粗提液,进一步进行ELISA和Western blot鉴定.ELISA结果显示,产物同时具有S、前S1和前S2抗原性.Western blot分析进一步表明,表达产物既能与S抗体结合,也能与前S1和前S2抗体结合.工程菌经高密度发酵,表达量达到300～600mg/L.抗原经纯化后进行电镜观察,形成直径20～35nm的球形颗粒.纯化抗原经SDS-PAGE分析,SS1和SS2多肽仍然保持完整,基本无降解.
作 者： 谭昌耀 蒋丽明 葛永红 袁进 金瓯 胡波 TAN Chang-Yao JIANG Li-Ming GE Yong-Hong YUAN Jin JIN Ou HU Bo 作者单位： 成都生物制品研究所生物技术研究室,成都,610023 刊 名： 生物工程学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(4) 分类号： Q786 关键词： 前S1 前S2 嵌合基因【修饰的含前S1、前S2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达】相关文章：
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