钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果
目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1.结论 shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达.该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具.
作 者： 龙跃生 孙卫文 赵绮华 曾涛 廖卫平 作者单位： 广州医学院,第二附属医院,神经科学研究所,广东,广州,510260 刊 名： 南华大学学报（医学版） 英文刊名： JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION) 年，卷(期)： 2009 37(3) 分类号： Q7 关键词： RNA干扰 钠通道 癫痫