羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达
目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化.方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RTPCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导,用Ni-NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化.结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571 bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE显示相对分子质量约43×103的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白.结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础.
作 者： 蓝兴国 杨佳 王艳红 李玉花 LAN Xing-Guo YANG Jia WANG Yan-Hong LI Yu-Hua 作者单位： 东北林业大学,生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150040 刊 名： 生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分类号： Q78 关键词： 羽衣甘蓝 自交不亲和 S13-b位点受体激酶 原核表达 纯化