哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达
根据哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800 bp的序列.将其克隆到pGEM-Teasy载体,测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因.用PCR方法去除其信号肽序列,定向克隆到原核表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒pGEX-4T-OmpK.IPTG诱导后能够在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为53kD的GST-OmpK融合蛋白.用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清.Western-blotting分析表明,它与从哈维氏弧菌中提取的约27 kD的外膜蛋白能够发生特异反应,提示外膜蛋白OmpK可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一.
作 者： 张崇文 于涟 毛芝娟 褚武英 钱荣华 ZHANG Chong-wen YU Lian MAO Zhi-juan CHU Wu-ying QIAN Rong-hua 作者单位： 张崇文,毛芝娟,褚武英,钱荣华,ZHANG Chong-wen,MAO Zhi-juan,CHU Wu-ying,QIAN Rong-hua(浙江大学生物医学工程学院,浙江,杭州,310027;浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029)于涟,YU Lian(浙江大学动物预防医学研究所,浙江,杭州,310029)
刊 名： 水产学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA 年，卷(期)： 2006 30(1) 分类号： Q78 Q936 关键词： 哈维氏弧菌 外膜蛋白 OmpK 原核表达