黄孢原毛平革菌酵母双杂交cDNA文库的构建及应用
作为研究木质素降解系统的模式微生物黄孢原毛平革菌,迄今还没有蛋白-蛋白相互作用方面的报道.本研究利用酵母双杂交技术构建了低氮培养基中培养2 d和3 d的酵母双杂交cDNA文库,分别得到2.5×105和3.0×105个重组子.以14-3-3蛋白为钓饵筛选3 d cDNA文库,在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp缺陷培养基平板上共获得了约600个单克隆,进一步分析发现,有30个克隆可激活3个报告基因.分离自这些克隆中的质粒DNA能转化大肠杆菌.利用Hae Ⅲ和Sau3A Ⅰ限制酶切分析可将它们分为4类.序列测定和同源分析结果表明,其中一类为14-3-3蛋白基因,提示14-3-3蛋白可形成二聚体,另外3类在GenBank没有明显同源的基因.通过SBASE网站预测,编号为Y2H333的克隆含有一个OB-fold核酸结合结构域(OB-fold nucleic acid binding domain).这些研究结果表明,所构建的黄孢原毛平革菌cDNA酵母杂交文库是成功的,14-3-3蛋白在黄孢原毛平革菌中能以蛋白-蛋白相互作用的形式发挥功能.图4表1参28
作 者： 胡国库 颜永红 姜权 吴波 冯红 张义正 HU Guoku YAN Yonghong JIANG Quan WU Bo FENG Hong ZHANG Yizheng 作者单位： 四川大学生命科学学院/四川省分子生物学及生物技术重点实验室,成都,610064 刊 名： 应用与环境生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 12(5) 分类号： Q94 关键词： 黄孢原毛平革菌 酵母双杂交 cDNA文库 14-3-3蛋白