粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性

粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性

粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoides farinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应.挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18).经扩增后,用Nde Ⅰ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在.表达产物经亲和层析纯化,用Western blot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性.

作 者： 朱健琦 刘志刚 高波 吉坤美 邢苗 ZHU Jian-Qi LIU Zhi-Gang GAO Bo JI Kun-Mei XING Miao   作者单位： 朱健琦,高波,ZHU Jian-Qi,GAO Bo(深圳大学生命科学学院,广东,深圳,518060)

刘志刚,邢苗,LIU Zhi-Gang,XING Miao(深圳大学生命科学学院,广东,深圳,518060;深圳市微生物基因工程重点实验室,广东,深圳,518060)

吉坤美,JI Kun-Mei(深圳市微生物基因工程重点实验室,广东,深圳,518060) 

刊 名： 昆虫学报  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ENTOMOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 49(2)  分类号： Q966  关键词： 粉尘螨   变应原   表达   纯化   特性鉴定