幽门螺杆菌HP0762蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备
目的:表达和纯化幽门螺杆菌HP0762蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体.方法:从幽门螺杆菌SS1中经PCR扩增得到了hp0762基因,将其克隆至含有6xHis编码序列的原核表达载体pET-28a(+)中,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrap Chelating HP亲和柱纯化重组蛋白,Western印迹进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备该蛋白的多克隆抗体;用EUSA和Western印迹检测抗血清.结果:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对HP0762重组蛋白的抗血清,抗体ELISA效价为1:256 000,Western印迹分析表明该抗体能特异性识别内源性HP0762.结论:完成了HP0762蛋白的原核高效表达与纯化,并制备了其高效价的多克隆抗体,为进一步对其进行疫苗研制与基因功能研究奠定了基础.
作 者： 李丛胜 邱炎 王艳春 韩秀萍 陶好霞 徐兴然 刘纯杰 LI Cong-Sheng QIU Yan WANG Yan-Chun HAN Xiu-Ping TAO Hao-Xia XU Xing-Ran LIU Chun-Jie 作者单位： 李丛胜,LI Cong-Sheng(西南大学,药学院,重庆,400716;军事医学科学院,生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京,100071)邱炎,王艳春,韩秀萍,陶好霞,刘纯杰,QIU Yan,WANG Yan-Chun,HAN Xiu-Ping,TAO Hao-Xia,LIU Chun-Jie(军事医学科学院,生物工程研究所,病原微生物与生物安全国家重点实验室,北京,100071)
徐兴然,XU Xing-Ran(西南大学,药学院,重庆,400716)
刊 名： 生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 21(2) 分类号： Q78 关键词： 幽门螺杆菌 HP0762蛋白 原核表达 多克隆抗体