产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制
利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入E. coli后,IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE结果表明,actA基因在两种载体中均获得表达,融合蛋白的大小分别约为120kDa和97kDa.以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制,获得4株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗ELISA效价为1∶5×104～1∶1×105.选取单抗1A5进行Western blot分析,结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应,且与Lm-4多抗血清的Western blot结果一致.actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础.
作 者： 殷月兰 董慧 焦新安 焦红梅 顾志强 袁舟 张晨菊 征超峰 作者单位： 扬州大学生物科学与技术学院 扬州 225009 刊 名： 微生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 46(6) 分类号： Q93 关键词： 产单核细胞李斯特菌 actA基因 表达 单克隆抗体