斑节对虾酚氧化酶原在大肠杆菌中的表达

斑节对虾酚氧化酶原在大肠杆菌中的表达

将斑节对虾酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因克隆进pET28a(+),在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析均能检测到一条分子量为79.4kDa的特异性条带,与推导的融合蛋白理论分子量82.4kDa基本相符;包涵体变性后对经Ni-NTA agarose纯化的变性液进行复性,表现出0.3851U/mg.min的PO活性;不同条件下的诱导表达结果显示,18℃时诱导培养能检测到目的蛋白的可溶性表这,经诱导9h后可溶性表达比例达到最高,约占茵体可溶性蛋白总量的5.56%;可溶性表达的目的蛋白纯化后经胰酶消化,可检测到分子量为60kDa、42.7kDa的特异性条带,并表现出O.4249U/mg.min的PO活性.

作 者： 韩凤丽 贡成良 曹广力 薛仁宇 HAN Feng-Li GONG Cheng-Liang CAO Guang-Li XUE Ren-Yu   作者单位： 苏州大学医学部,江苏苏州,215123  刊 名： 常熟理工学院学报  英文刊名： JOURNAL OF CHANGSHU INSTITUTE OF TECHNOLOGY  年，卷(期)： 2009 23(4)  分类号： Q344+.13  关键词： 蛋白纯化   proPO   原核表达   酶活性  

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