在活体小鼠中筛选lZP3基因RNAi有效靶位点的研究
ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点.本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zona pellucida 3 gene of Lagurus lagurus, lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3 mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3 mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-based transfection method, HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-time PCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3 mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3 mRNA的有效靶位点.结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3 mRNA的表达.研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法.
