重组人胰高血糖素样肽-1的表达及生物学活性
将人工合成的人胰高血糖素样肽-1(human glucagon-like peptide-1,hGLP-1)基因插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成rhGLP-1与硫氧还蛋白(thioredox)及六聚组氨酸(hexahistidine)的融合表达载体pET32-GLP-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,经IPTG诱导发酵的菌体超声破碎后,裂解液用Ni离子亲和层析纯化得到融合蛋白,经肠激酶裂解,再次Ni离子亲和层析,得到rhGLP-1样品.经SDS-PAGE和等电聚焦检测,样品纯度大于90%,等电点介于pH5.2～pH5.85之间.质谱测定rhGLP-1分子量为3 355.0kDa,肽图分析得到2 097.7kDa和1 005.5kDa两个胰蛋白酶酶解片断,均与理论分析结果一致.动物实验表明重组蛋白具有明显的降血糖活性和促胰岛素分泌作用.
