p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用
构建p38 Loop-12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其"T-X-Y"双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TAT-EGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14b-Gis-TATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTE-p38L12和HTE-p38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV-1 TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能.
作 者： 郭爱华 刘志锋 李海玉 唐靖 李志杰 刘亚伟 龚小卫 刘靖华 邓鹏 姜勇 GUO Ai-Hua LIU Zhi-Feng LI Hai-Yu TANG Jing LI Zhi-Jie LIU Ya-Wei GONG Xiao-Wei LIU Jing-Hua DENG Peng JIANG Yong 作者单位： 南方医科大学病理生理学教研室和广东省功能蛋白质组学重点实验室,广州,510515 刊 名： 中国生物化学与分子生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(5) 分类号： Q2 关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白 丝裂原活化蛋白 Loop 12 细胞转导系统