重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定
根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列,设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段,经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段.构建pET22b(+)/rhLep表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%以上.表达产物用Ni2+亲和层析柱纯化,SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD.MTT比色法实验显示,当低剂量(10～30ng/mL)时,rhLep具有促进内皮细胞生长的作用;在高剂量(50～225ng/mL)时,rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性.其最大杀伤率达到98.8%.吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用.以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础.
作 者： 吴娜 张长弓 谢莲英 王臻 颜江华 WU Na ZHANG Chang-Gong XIE Lian-Ying WANG Zhen YAN Jiang-Hua 作者单位： 吴娜,谢莲英,王臻,WU Na,XIE Lian-Ying,WANG Zhen(厦门大学生命科学学院,厦门,361005)张长弓,颜江华,ZHANG Chang-Gong,YAN Jiang-Hua(厦门大学医学院抗癌研究中心,厦门,361005)
刊 名： 生物工程学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(5) 分类号： Q786 关键词： 瘦素 基因构建 表达 细胞存活率