小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.
作 者： 杨根岭 张晋平 徐倩 谭冬梅 赖国旗 谭毅 作者单位： 重庆医科大学实验动物中心,重庆,400016 刊 名： 重庆医科大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CHONGQING MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2010 35(2) 分类号： Q953.5 关键词： Mouse killer基因 RNA 干扰 重组腺病毒 Mouse killer gene RNA interference Recombinant adenovirus