小鼠神经生长因子前导肽和人内吗啡肽-2融合基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽(PN)和人内吗啡肽-2(EM-2)融合基因的重组非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的基因经酶切插入pAxCAwt载体,构建PN-EM-2-pAxCAwt重组黏粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒.PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化,采用TCID50法测定病毒滴度;体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,酶联免疫反应(EIA)法测定表达产物浓度.结果:融合基因序列正确,PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度为2.03×1010pfu/ml.NIH3T3细胞转染病毒后,细胞培养液内可检测到EM-2的表达,明显高于空转染及未转染细胞(P＜0.05),且随时间的延长,表达水平逐渐上升.结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,为进一步将其应用于慢性疼痛的基因治疗奠定了基础.
作 者： 吴飞翔 俞卫锋 黄盛东 徐学武 龚德军 董刚 袁扬 孙玉明 作者单位： 吴飞翔,俞卫锋,徐学武,董刚,孙玉明(第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,200438)黄盛东,龚德军,袁扬(第二军医大学长海医院胸心外科,解放军胸心外科研究所,上海,200433)
刊 名： 第二军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2007 28(11) 分类号： 关键词： 内吗啡肽-2 神经生长因子 腺病毒科