神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化

神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化

目的构建和转化神经突起因子(Neuritin)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础.方法用PCR扩增neuritin全长cDNA中编码开放读框的基因片段;将该基因片段与pLex-A载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株.结果成功构建pLexA-neuritin重组质粒.转化有重组质粒和pLexA空载体的2种EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落,同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16 h后,A600均值均为0.9.表明重质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用.结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选.

作 者： 罗星 张峪涵 于娜 孔雪 徐坚 顾少华 杨磊 黄瑾   作者单位： 罗星(新疆石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室,石河子,832002;复旦大学生命科学院遗传学研究所)

张峪涵,于娜,孔雪,杨磊,黄瑾(新疆石河子大学医学院生物化学教研室/新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室,石河子,832002)

徐坚,顾少华(复旦大学生命科学院遗传学研究所) 

刊 名： 中国公共卫生  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PUBLIC HEALTH  年，卷(期)： 2006 22(4)  分类号： Q753.71  关键词： 神经突起因子   酵母双杂交   诱饵质粒