牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定
肠激酶(enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、 rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 纯化、 N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、 N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17
作 者： 李德华 苟兴华 胡海洋 徐琦 刘忠荣 吴洽庆 余晓东 LI Dehua GOU Xinghua HU Haiyang XU Qi LIU Zhongrong WU Qiaqing YU Xiaodong 作者单位： 李德华,LI Dehua(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047;成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)苟兴华,胡海洋,刘忠荣,GOU Xinghua,HU Haiyang,LIU Zhongrong(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)
徐琦,XU Qi(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;四川大学化工学院,成都,610065)
吴洽庆,WU Qiaqing(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;中国科学院成都生物研究所,成都,610041)
余晓东,YU Xiaodong(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047)
刊 名： 应用与环境生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年，卷(期)： 2006 12(6) 分类号： Q78 关键词： 肠激酶(enterokinase,EK) 甲醇酵母(Pichia pastoris) 高密度发酵