奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用.为研究GnRH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用,构建了GnRH cDNA的原核表达载体并进行融合表达.利用RT-PCR方法从丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41.6%.菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,Amylose-sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白.目的蛋白经Factor Xa酶切裂解,Amylose-sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白.以80μg/只的剂量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对GnRH前体蛋白的血清抗体应答,免疫组抗体水平显著高于空白组(P＜0.05),且加强免疫第5周后抗体效价为0.707±0.320,达到高峰值,说明表达产物具有免疫原性,可以刺激机体产生免疫应答.

作 者： 丁炜东 曹丽萍 吴婷婷 DING Wei-Dong CAO Li-Ping WU Ting-Ting   作者单位： 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室,无锡,214081  刊 名： 生物工程学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分类号： Q786  关键词： 奥利亚罗非鱼   促性腺激素释放激素   促性腺激素释放激素相关肽   原核表达   抗体   免疫原性  

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